Tinción de Gram
- Fundamentos: Es un tipo de tinción diferencial que se basa en las paredes celulares de las bacterias, primariamente en la presencia de peptidoglucano y separa a las bacterias en grupos Gram-positivas, y Gram-negativas.
- Características: Es casi siempre el primer paso para identificar bacterias y una de sus características es que una tinción Gram-positiva resulta en un color azuloso mientras que una negativa resulta en uno rojizo.
Bacterias gram-positivas de Ántrax en una muestra de fluido cerebro-espinal.
- Usos: Se usa en biopsias humanas. así como el análisis de fluidos corporales cuando se sospecha de infección.
- Aplicaciones: Médicas, Bacteriológicas dentro del laboratorio.
- Material: Genciana de violeta; agua, mechero, yodo, alcohol, safranina.
- Técnica: En resumen, se aplica genciana o cristal de violeta a la muestra (después de hacer el frotis adecuadamente), se aplica mordiente yodo después de esperar 1 minuto. Después se aplica el decolorante de etanol al 75%. Más adelante se aplica un colorante de contraste como la safranina y se deja reposar por un minuto.
Tinción de Ziehl-Neelsen - Fundamentos: Es una técnica de tinción diferencial utilizada con bacterias con resistencia a la decoloración de la fucsina básica. No pueden ser clasificadas según la tinción de Gram, por lo cual se utiliza una combinación de calor y tinciones concentradas.
Mycobacterium tuberculosis con tinción Ziehl-Neelsen.
- Características: La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva solidificación de lo ácidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energía cinética de las moléculas del colorante lo cual también facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloración son de color rojo y la que no se ven de color azul, ya que se utiliza azul de metileno como tinción de contraste.
- Usos: Literalmente se utiliza en las bacterias cuya pared celular impediría una exitosa diferenciación mediante tinción de Gram.
- Aplicaciones: Médicas y de tinción diferencial dentro del área bacteriológica.
- Material: Papel, carbol fuschil, azul de metileno, etanol, ácido hidroclórico.
- Técnica: Se cubre la muestra con papel, después se llena de carbol fuschil un lado del porta objetos por 3-5 minutos mientras se calienta con vapor o la placa misma. Se remueve el papel y se decoloriza con una mezcla de ácido hidroclórico y etanol. Después se agrega azul de metileno y listo.
Tinción de Hematoxilina-eosina
- Fundamentos: Es la técnica más usada de tinción en histología, y la más usada en los diagnósticos médicos, especialmente cuando un patólogo ve una biopsia en la cual sospecha hay cáncer.
Espécimen histológico de una muestra de tejido pulmonar humano con H&E.
- Características: Requiere la aplicación de un complejo de hematoxilina y aluminio, esto colora los núcleos celulares de azul. Después de esto se hace una contratinción de una solución acuosa o alcohólica de Eosina Y, que colorea otras estructuras eosinofílicas de tonos de rojo, rosa y naranja.
- Usos: Se utiliza primariamente en la histología, como ya se ha mencionado, de manera que se pueden encontrar diversas anormalidades celulares en los análisis con ésta técnica.
- Aplicaciones: Histología, medicina, virología, etc.
- Material: Xilol, Alcohol, Hematoxilina y Eosina.
- Técnica: Se sumerge la muestra en xileno para eliminar cualquier exceso de parafina. Acto seguido pasa por una serie de alcoholes a 100, 95 y 70 grados respectivamente. Se lava en agua para eliminar el exceso de alcohol, se sumerge en hematoxilina por 10 minutos y se pasa rápidamente en alcohol ácid. Se lava y se sumerge 30 segundos en eosina, se pasa por otra serie de alcoholes en serie creciente y finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol.
